在高效液相色譜(HPLC)分析中，當(dāng)分析芳香族化合物位置異構(gòu)體時(shí)，若使用常規(guī) C18色譜柱通常難以有效分離，此時(shí)改用五氟苯基柱(PFP柱)是一種有效策略。PFP柱憑借其特殊的選擇性已成為眾多分析工作者的得力助手。本文將全面解析PFP柱的優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用場(chǎng)景的案例，帶您深入了解這款"氟"凡的色譜分離利器。
五氟苯基柱優(yōu)勢(shì)
五氟苯基柱是一種在硅膠基質(zhì)表面鍵合五氟苯基(C6F5)或五氟苯乙基固定相的特殊色譜柱。在分離芳香族位置異構(gòu)體時(shí)，五氟苯基（PFP）固定相的偶極-偶極相互作用是其區(qū)別于C18柱的核心優(yōu)勢(shì)之一。這種作用力能夠敏銳地區(qū)分取代基位置差異導(dǎo)致的分子極性分布變化，從而解決常規(guī)反相色譜難以分離的問(wèn)題。
下面跟隨小編一起看一下五氟苯基柱的幾個(gè)應(yīng)用場(chǎng)景吧！
應(yīng)用場(chǎng)景-芳香族位置異構(gòu)體的分離
案例一
在2-萘磺酸樣品檢測(cè)過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)使用普通C18色譜柱無(wú)法分開(kāi)樣品中的1, 5-萘二磺酸與2, 6-萘二磺酸，分析結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)兩者均為萘環(huán)二磺酸位置異構(gòu)體，極性相近，普通C18主要依賴疏水相互作用，對(duì)芳香族位置異構(gòu)體的選擇性差異是有限的。
1, 5-萘二磺酸 2, 6-萘二磺酸
在不改變流動(dòng)相的前提下，將色譜柱更換為Alphasil S-PFP，由于五氟苯基柱可以提供偶極-偶極等作用機(jī)制，對(duì)于1, 5-萘二磺酸與2, 6-萘二磺酸這種芳香位置異構(gòu)體，可以提供不一樣的選擇性，分離效果更好。
（1: 1, 5-萘二磺酸；2: 2, 6-萘二磺酸；3: 2, 7-萘二磺酸；4: 1-萘磺酸；5: 2-萘磺酸）
案例二
類似的案例，進(jìn)行國(guó)標(biāo)檢測(cè)時(shí)也會(huì)遇到，例如GB 5009.82-2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素A、D、E的測(cè)定》中，維生素E的四種異構(gòu)體（α-、β-、γ-、δ-生育酚）也屬于芳香族位置異構(gòu)體，其中β-生育酚和γ-生育酚由于結(jié)構(gòu)相似（甲基取代位置不同），在普通 C18色譜柱上難以分離，通常會(huì)出現(xiàn)共流出現(xiàn)象。在 GB 5009.82-2016 中，第一法（反相高效液相色譜法） 明確提到可以使用PFP柱進(jìn)行維生素E異構(gòu)體的分離。
如下圖所示，使用Alphasil S-PFP進(jìn)行4種維生素E異構(gòu)體檢測(cè)也可以獲得良好的分離。
4種維生素E異構(gòu)體的檢測(cè)（Alphasil S-PFP）
應(yīng)用指南-流動(dòng)相的選擇，乙腈or甲醇？
主成分 雜質(zhì)
為了分離某化藥中的主成分與雜質(zhì)，采用乙腈/水體系作為流動(dòng)相并嘗試了多款C18色譜柱，結(jié)果均無(wú)法達(dá)到令人滿意的效果。
通過(guò)查詢結(jié)構(gòu)可知，二者互為芳香族位置異構(gòu)體，所以PFP柱是分離該類化合物的理想選擇。但實(shí)際結(jié)果中PFP柱的分離反而更差，這是什么原因？
C18和PFP色譜柱的分離結(jié)果對(duì)比圖
（流動(dòng)相：乙腈/水）
原來(lái)當(dāng)乙腈作為流動(dòng)相時(shí)，由于乙腈結(jié)構(gòu)中含有不飽和碳氮三鍵，大量的乙腈分子會(huì)包圍同分異構(gòu)體，從而干擾固定相和被分析物之間的相互作用，導(dǎo)致PFP柱分離能力嚴(yán)重下降。
當(dāng)我們把乙腈更換為甲醇后，甲醇的羥基與PFP固定相的氟原子形成互補(bǔ)作用，可增強(qiáng)對(duì)位置異構(gòu)體的區(qū)分。結(jié)果主成分與雜質(zhì)的分離度達(dá)到了3以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足了檢測(cè)需求。
PFP色譜柱的分離結(jié)果
（流動(dòng)相：甲醇/水）
結(jié)論：PFP柱—破解芳香異構(gòu)體分離難題的“偶極密鑰”
當(dāng)C18柱在芳香族位置異構(gòu)體面前“束手無(wú)策”時(shí)，五氟苯基（PFP）色譜柱憑借其特殊的“偶極魔法”，成為分離難題的理想解決方案。選擇PFP柱，不僅是更換固定相，更是解鎖芳香異構(gòu)體分離的全新維度！
但要注意的是，當(dāng)選擇PFP柱分離芳香族位置異構(gòu)體類樣品時(shí)，采用甲醇作為流動(dòng)相體系，才能精準(zhǔn)激發(fā)PFP柱的分離潛力。
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“你在異構(gòu)體分離中用過(guò)PFP柱嗎？歡迎留言分享案例！”
